滕州浩瀚與您分享液相色譜儀干貨
色譜法的zui早應用是用于分離植物色素，其方法是這樣的：在一玻璃管中放入碳酸鈣，將含有植物色素（植物葉的提取液）的石油醚倒入管中。此時，玻璃管的上端立即出現(xiàn)幾種顏色的混合譜帶。然后用純石油醚沖洗，隨著石油醚的加入，譜帶不斷地向下移動，并逐漸分開成幾個不同顏色的譜帶，繼續(xù)沖洗就可分別接得各種顏色的色素，并可分別進行鑒定。色譜法也由此而得名。但其分離的原理仍然是一樣的。我們仍然叫它色譜分析。色譜儀作為一種高儀器，對于使用方面當然要求比較高嘍，接下來滕州浩瀚與您分享液相色譜儀干貨！色譜法的zui早應用是用于分離植物色素，其方法是這樣的：在一玻璃管中放入碳酸鈣，將含有植物色素（植物葉的提取液）的石油醚倒入管中。此時，玻璃管的上端立即出現(xiàn)幾種顏色的混合譜帶。然后用純石油醚沖洗，隨著石油醚的加入，譜帶不斷地向下移動，并逐漸分開成幾個不同顏色的譜帶，繼續(xù)沖洗就可分別接得各種顏色的色素，并可分別進行鑒定。色譜法也由此而得名。但其分離的原理仍然是一樣的。我們仍然叫它色譜分析。色譜儀作為一種高儀器，對于使用方面當然要求比較高嘍，接下來滕州浩瀚與您分享液相色譜儀干貨！色譜法的zui早應用是用于分離植物色素，其方法是這樣的：在一玻璃管中放入碳酸鈣，將含有植物色素（植物葉的提取液）的石油醚倒入管中。此時，玻璃管的上端立即出現(xiàn)幾種顏色的混合譜帶。然后用純石油醚沖洗，隨著石油醚的加入，譜帶不斷地向下移動，并逐漸分開成幾個不同顏色的譜帶，繼續(xù)沖洗就可分別接得各種顏色的色素，并可分別進行鑒定。色譜法也由此而得名。但其分離的原理仍然是一樣的。我們仍然叫它色譜分析。色譜儀作為一種高儀器，對于使用方面當然要求比較高嘍，接下來滕州浩瀚與您分享液相色譜儀干貨！
一、使用注意事項
1、開啟輸液泵后，應放空泵的輸出端，排除泵體內的氣泡再與進樣閥、色譜柱相接，方能使流速穩(wěn)定。
2、次使用的色譜柱或進樣過高濃度樣品的色譜柱，應在設置流量下，將柱出口放空，老化數(shù)小時后，再與檢測器的流通池輸入端相連接。
3、開啟柱箱溫度控制器后，應注意色譜柱的zui高使用溫度，防止過溫。
4、檢測器開啟后，請勿帶電搬動位置，防止機內氘燈損壞。
5、流通池流出的廢液必須集中收集處理，防止污染環(huán)境。
6、必須使用平頭專用注射針進入樣品，嚴禁使用普通針尖針頭進樣。若進樣量小于定量管的容量時,可使用微量平口注射器注入六通閥后(不要拔出注射器)，立即轉動六通閥，完成一次進樣。
7、當信號電壓超過1V或滿量程信號超過量程范圍時，有可能出現(xiàn)“平頭峰”，其積分面積及保留時間會產生很大的誤差，此時應稀釋樣品或擴大量 程范圍后再 進樣。
二、流動相溶劑瓶的保養(yǎng)
溶劑瓶是流動相的起點，通常是盛放水相溶液或是有機相溶液。
1、水相溶液
對于水相溶液來說，要的問題是防止污染。雖然液相用的水大都經過殺菌處理，但是細菌的生命力很頑強，在適當?shù)臏囟群凸庹涨闆r下，它們就會活躍起來，如果在流動相里加入磷酸鹽一類的添加劑，它們是如虎添翼。所以，對于溶劑瓶我們要做的非常重要的工作就是勤換流動相，常換常新。
2、有機相溶液
對于有機相溶液，可以不用擔心細菌繁殖的問題。但是有機相容易發(fā)生聚合，特別是乙腈在適宜的光照條件下易發(fā)生聚合，瓶子里就會出現(xiàn)一些絮狀的聚合沉淀物。為了防止聚合過程的發(fā)生，裝乙腈時要用棕色的溶劑瓶，避免陽光直射，換乙腈時應當棄去瓶底剩余的溶液。
3、清洗過濾
溶劑瓶里的過濾頭，其作用是為了防止溶液瓶中的顆粒雜質進入到儀器的流路系統(tǒng)中，它的材質通常分為玻璃燒結石英和不銹鋼，如果不慎堵塞會造成流動相吸液不暢，因此必須進行清洗，玻璃材質的通常是用稀硝酸泡，而不銹鋼材質的可以直接進行超聲清洗。
4、流動相的脫氣
脫氣的目的是為了除去流動相中溶解的氣體，使色譜泵的輸液準確，保留時間和色譜峰面積再現(xiàn)性提高;使基線穩(wěn)定，信噪比增加，防止氣泡引起尖峰，從而提高檢測器性能;減少死體積，防止填料氧化，從而保護色譜柱。目前常用的脫氣方法有以下4種。
(1) 氦氣脫氣法:利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高；
(2) 加熱回流法:效果較好，但操作復雜，且有毒性揮發(fā)污染；
(3) 真空脫氣法:易抽走有機相；
(4) 超聲脫氣法:流動相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10～15min，此方法效果較差，但操作簡單。實際工作中，超聲脫氣法操作簡單，仍被廣泛應用，雖然此方法有時會引起氣體溶解度的增加，但基本上能滿足日常分析操作的要求。
三、常見故障及處理
1、柱壓高原因
（1）緩沖液鹽分如（乙酸銨等）沉積于柱內。
（2）樣品污染沉積。處理對于種情況先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓逐漸下降后，相應提高流速沖洗，柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；對于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定），再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。
2、氣泡溢出
流動相內有氣泡，關閉泵，打開泄壓閥，打開purg鍵，清洗脫氣，氣泡不斷從過濾器冒出，進入流動相，無論打開purge鍵幾次，都無法清除不斷產生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內，過濾器內部由于霉菌的生長繁殖，形成菌團，阻塞了過濾器，緩沖液難以流暢地通過過濾器，空氣在泵的壓力作用下經過濾器進入流動相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，超聲清洗幾分鐘即可；亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時，輕輕震蕩幾次，再將過濾器用純水清洗幾次，打開泄壓閥，打開purge鍵清洗脫氣，如仍有氣泡不斷從過濾器冒出，繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出，說明過濾器內部的霉菌菌團已被硝酸破壞，流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥，打開泵，流速調1.0～3.0mL/min，純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關閉泄壓閥，純甲醇沖洗半小時即可。
3、壓力波動大，流量不穩(wěn)定
原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量，不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底，避免吸入空氣，流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
4、出峰不，峰分叉
（1）色譜柱被污染。
（2）柱頭填料塌陷。處理對于種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定），再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如，沖洗后依然出峰不，則考慮第二種情況。對于第二種情況，擰開柱頭，檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分（污染的填料），裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復幾次，直裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30分鐘以上。
5、峰面積重復性不
（1）進樣閥漏液。
（2）加樣針不到位。
（3）液量不足。處理對于種情況換進樣閥墊圈；對于第二種情況加樣針插到底，注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉換到INJECT狀態(tài)，以進樣量的準確。日常工作中，液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要，如要注意不要讓空氣進入輸液系統(tǒng)和高壓泵中，儲液器內的溶液如長時間未用應清洗儲液器并換溶液，每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈，防止無機鹽析出或沉積；樣品的前處理也很重要，任何樣品都要盡可能地去除雜質，完全溶解，盡量減少對色譜柱的污染，以延長色譜柱的使用壽命，同時避免注射過濃的樣品溶液，以免殘留液在進樣閥內析出固體引起堵塞；色譜柱作好標記，用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。
6、既無壓力指示，又無液體流過
（1）泵密封墊圈磨損。
（2）大量氣泡進入泵體。處理對于種情況，換密封墊圈；對于第二種情況，在泵作用的同時，用一個50mL的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
一、使用注意事項
1、開啟輸液泵后，應放空泵的輸出端，排除泵體內的氣泡再與進樣閥、色譜柱相接，方能使流速穩(wěn)定。
2、次使用的色譜柱或進樣過高濃度樣品的色譜柱，應在設置流量下，將柱出口放空，老化數(shù)小時后，再與檢測器的流通池輸入端相連接。
3、開啟柱箱溫度控制器后，應注意色譜柱的zui高使用溫度，防止過溫。
4、檢測器開啟后，請勿帶電搬動位置，防止機內氘燈損壞。
5、流通池流出的廢液必須集中收集處理，防止污染環(huán)境。
6、必須使用平頭專用注射針進入樣品，嚴禁使用普通針尖針頭進樣。若進樣量小于定量管的容量時,可使用微量平口注射器注入六通閥后(不要拔出注射器)，立即轉動六通閥，完成一次進樣。
7、當信號電壓超過1V或滿量程信號超過量程范圍時，有可能出現(xiàn)“平頭峰”，其積分面積及保留時間會產生很大的誤差，此時應稀釋樣品或擴大量 程范圍后再 進樣。
二、流動相溶劑瓶的保養(yǎng)
溶劑瓶是流動相的起點，通常是盛放水相溶液或是有機相溶液。
1、水相溶液
對于水相溶液來說，要的問題是防止污染。雖然液相用的水大都經過殺菌處理，但是細菌的生命力很頑強，在適當?shù)臏囟群凸庹涨闆r下，它們就會活躍起來，如果在流動相里加入磷酸鹽一類的添加劑，它們是如虎添翼。所以，對于溶劑瓶我們要做的非常重要的工作就是勤換流動相，常換常新。
2、有機相溶液
對于有機相溶液，可以不用擔心細菌繁殖的問題。但是有機相容易發(fā)生聚合，特別是乙腈在適宜的光照條件下易發(fā)生聚合，瓶子里就會出現(xiàn)一些絮狀的聚合沉淀物。為了防止聚合過程的發(fā)生，裝乙腈時要用棕色的溶劑瓶，避免陽光直射，換乙腈時應當棄去瓶底剩余的溶液。
3、清洗過濾
溶劑瓶里的過濾頭，其作用是為了防止溶液瓶中的顆粒雜質進入到儀器的流路系統(tǒng)中，它的材質通常分為玻璃燒結石英和不銹鋼，如果不慎堵塞會造成流動相吸液不暢，因此必須進行清洗，玻璃材質的通常是用稀硝酸泡，而不銹鋼材質的可以直接進行超聲清洗。
4、流動相的脫氣
脫氣的目的是為了除去流動相中溶解的氣體，使色譜泵的輸液準確，保留時間和色譜峰面積再現(xiàn)性提高;使基線穩(wěn)定，信噪比增加，防止氣泡引起尖峰，從而提高檢測器性能;減少死體積，防止填料氧化，從而保護色譜柱。目前常用的脫氣方法有以下4種。
(1) 氦氣脫氣法:利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高；
(2) 加熱回流法:效果較好，但操作復雜，且有毒性揮發(fā)污染；
(3) 真空脫氣法:易抽走有機相；
(4) 超聲脫氣法:流動相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10～15min，此方法效果較差，但操作簡單。實際工作中，超聲脫氣法操作簡單，仍被廣泛應用，雖然此方法有時會引起氣體溶解度的增加，但基本上能滿足日常分析操作的要求。
三、常見故障及處理
1、柱壓高原因
（1）緩沖液鹽分如（乙酸銨等）沉積于柱內。
（2）樣品污染沉積。處理對于種情況先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓逐漸下降后，相應提高流速沖洗，柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；對于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定），再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。
2、氣泡溢出
流動相內有氣泡，關閉泵，打開泄壓閥，打開purg鍵，清洗脫氣，氣泡不斷從過濾器冒出，進入流動相，無論打開purge鍵幾次，都無法清除不斷產生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內，過濾器內部由于霉菌的生長繁殖，形成菌團，阻塞了過濾器，緩沖液難以流暢地通過過濾器，空氣在泵的壓力作用下經過濾器進入流動相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，超聲清洗幾分鐘即可；亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時，輕輕震蕩幾次，再將過濾器用純水清洗幾次，打開泄壓閥，打開purge鍵清洗脫氣，如仍有氣泡不斷從過濾器冒出，繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出，說明過濾器內部的霉菌菌團已被硝酸破壞，流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥，打開泵，流速調1.0～3.0mL/min，純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關閉泄壓閥，純甲醇沖洗半小時即可。
3、壓力波動大，流量不穩(wěn)定
原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量，不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底，避免吸入空氣，流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
4、出峰不，峰分叉
（1）色譜柱被污染。
（2）柱頭填料塌陷。處理對于種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定），再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如，沖洗后依然出峰不，則考慮第二種情況。對于第二種情況，擰開柱頭，檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分（污染的填料），裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復幾次，直裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30分鐘以上。
5、峰面積重復性不
（1）進樣閥漏液。
（2）加樣針不到位。
（3）液量不足。處理對于種情況換進樣閥墊圈；對于第二種情況加樣針插到底，注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉換到INJECT狀態(tài)，以進樣量的準確。日常工作中，液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要，如要注意不要讓空氣進入輸液系統(tǒng)和高壓泵中，儲液器內的溶液如長時間未用應清洗儲液器并換溶液，每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈，防止無機鹽析出或沉積；樣品的前處理也很重要，任何樣品都要盡可能地去除雜質，完全溶解，盡量減少對色譜柱的污染，以延長色譜柱的使用壽命，同時避免注射過濃的樣品溶液，以免殘留液在進樣閥內析出固體引起堵塞；色譜柱作好標記，用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。
6、既無壓力指示，又無液體流過
（1）泵密封墊圈磨損。
（2）大量氣泡進入泵體。處理對于種情況，換密封墊圈；對于第二種情況，在泵作用的同時，用一個50mL的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
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